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你還在糾結(jié)是做MTT還是CCK8?

日期:2022-04-22瀏覽:4760次

細(xì)胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種,檢測藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況,即通過檢測材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長的影響,來評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測,另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像,更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。


細(xì)胞增殖檢測實(shí)驗(yàn)的意義:

細(xì)胞增殖是細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下,通過DNA復(fù)制等反應(yīng),完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化,進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性,目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué),分子生物學(xué),藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。


MTT法

在活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臢化合物,用二甲基亞砜(DMSO)將其溶解成溶液,用酶標(biāo)儀測定其濃度(OD490或者570),從而定量測定細(xì)胞的存活比例,細(xì)胞增殖越多越快,對(duì)應(yīng)的吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,對(duì)應(yīng)的吸光度越低。

CCK-8法 

CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗(yàn)明正身。在脫氫酶作用下,WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物,用酶聯(lián)免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。


CCK8與MTT法的主要區(qū)別如下:

一、原理不同

1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 試劑盒最先是由日本同仁化學(xué)研究所(Dojindo)開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。

2、MTT法:其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臜,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

二、特點(diǎn)不同

1、Cell Counting Kit-8:靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好;操作簡便,省時(shí)省力;水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細(xì)胞;無需放射性同位素和有機(jī)溶劑,對(duì)細(xì)胞毒性低;適合于高通量藥物篩選。

2、MTT法:特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

目前市面上能提供的CCK-8試劑盒有國產(chǎn),進(jìn)口分裝以及進(jìn)口原裝之分,國產(chǎn)的CCK-8試劑盒在質(zhì)量穩(wěn)定性不亞于進(jìn)口原裝,同樣具有較好的檢測結(jié)果,同時(shí)價(jià)格方面低于進(jìn)口原裝,具有高的性價(jià)比。



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