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CCK8法測定細(xì)胞增殖注意事項

日期:2021-07-29瀏覽:9028次

    CCK8全稱Cell Counting Kit-8,是一種基于WST-8(化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT,在電子耦合試劑存在的情況下,WST-8可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。CCK8法在藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面應(yīng)用廣泛。

注意事項:
    1、接種細(xì)胞應(yīng)選對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行,同時需要選擇合適的細(xì)胞濃度。
    2、檢測的時,試劑加入的時候沿著孔壁加入,不要產(chǎn)生氣泡,否則會干擾讀數(shù)。
    3、檢測OD值范圍在0.1-2之間,較為理想的OD值范圍為1-2。
    4、酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
    5、為了個人安全,建議穿戴實驗服和一次性實驗手套操作。

心得體會:
    1、同MTT實驗一樣,96孔板的邊緣效應(yīng),邊孔的水分蒸發(fā)很快,培養(yǎng)液及里面的藥物會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象,這樣會導(dǎo)致數(shù)據(jù)的誤差較大,因此在實驗設(shè)置的時候,一般將邊孔留出為空白孔,在孔中加入液體,以使中間孔的水分飽和。
    2、懸浮細(xì)胞由于染色困難,一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長CCK8孵育時間。
    3、CCK8試劑保存時間,0-5℃下保存6個月,-20℃下避光保存1年。
    4、金屬對實驗結(jié)果有影響,實驗中應(yīng)想法將其去除。
    

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