精品国产乱码久久久久久呢,国产欧美精品区一区二区三区,激情欧美日韩一区二区,成人精品视频99在线观看免费

歡迎訪問(wèn)西安昊興生物科技有限公司網(wǎng)站

返回首頁(yè)|聯(lián)系我們

全國(guó)統(tǒng)一服務(wù)熱線:

4000298128
技術(shù)文章您當(dāng)前的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 重組DNA的構(gòu)建(載體構(gòu)建)

重組DNA的構(gòu)建(載體構(gòu)建)

日期:2021-07-29瀏覽:8125次

基本原理:
    外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組,重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達(dá)的基因?yàn)橥庠碊NA,載體是指能夠攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并在其中進(jìn)行擴(kuò)增或誘導(dǎo)外源基因表達(dá)的工具,其中質(zhì)粒載體最為常用。
    質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體外具有自我復(fù)制的DNA分子。所有的質(zhì)粒都有復(fù)制子、選擇性標(biāo)志和多克隆位點(diǎn)3個(gè)共同的特性。質(zhì)粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數(shù)、多接頭以及篩選插入片段的能力,pcDNA3.1(+/-)是比較常用的真核表達(dá)載體。

基本步驟:
    1、目的DNA片段的獲得。這一步驟中,可以選擇通過(guò)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增來(lái)獲得目的DNA片段,也可以通過(guò)化學(xué)合成的方法來(lái)獲得目的DNA片段,這里值得注意的點(diǎn),目的DNA片段5'和3'端需要引物合適的酶切位點(diǎn),方便后續(xù)與質(zhì)粒載體的連接。
    2、目的DNA片段與質(zhì)粒連接。通過(guò)選擇的酶切位點(diǎn)將環(huán)形的質(zhì)粒酶切成線性,與目的DNA片段進(jìn)行連接反應(yīng),而后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,進(jìn)行培養(yǎng)。
    3、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化及鑒定。挑選2-3個(gè)單克隆置于含有抗性的液體
培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定,雙酶切后電泳,能夠看到存在與目的DNA片段大小一致的條帶,說(shuō)明此單克隆插入了目的DNA片段,而至于目的DNA片段中堿基序列是否存在突變點(diǎn),需進(jìn)行一代測(cè)序驗(yàn)證。只有同時(shí)滿足雙酶切鑒定大小合適并且測(cè)序后DNA堿基序列*一致的單克隆菌才被認(rèn)定為構(gòu)建成功的重組子。
    4、鑒定正確的重組質(zhì)粒擴(kuò)大培養(yǎng)及保種。將上述構(gòu)建成功的重組子質(zhì)粒菌種再一次擴(kuò)大培養(yǎng),提取重組子質(zhì)粒以及進(jìn)行保種,方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
    值此,包含此外源DNA的重組DNA的構(gòu)建算全部完成。

注意事項(xiàng)及心得體會(huì):
    1、目的DNA片段獲取過(guò)程中,如果選擇通過(guò)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增方法來(lái)獲得,建議選擇高保真的酶來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),這樣在一定程度上可以降低因?yàn)閿U(kuò)增反應(yīng)而產(chǎn)生的堿基引入錯(cuò)誤。
    2、PCR產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物盡量不要放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),最好是即時(shí)進(jìn)行連接。
    3、連接體系中載體與目的基因的分子數(shù)比例,需要摸索合適的比例,一般為1:3--1:10,合適的比例能夠提高連接效率。
  

上一篇:吃東西是為了饑餓還是為了享樂(lè)?原來(lái)它們的腦回路并不相同

下一篇:CCK8法測(cè)定細(xì)胞增殖注意事項(xiàng)

QQ咨詢 聯(lián)系方式 二維碼

服務(wù)熱線

17791407282

掃一掃,關(guān)注我們

风流少妇又紧又爽又丰满| 一性一交一口添一摸视频| 中文字幕AV伊人AV无码AV| 99国产精品久久久久久久日本竹| 欧美精品成人A在线观看| 欧美人妻AⅤ中文字幕| 京香julia| 又嫩又硬又黄又爽的视频| 最近中文字幕完整在线看一| 我的邻居是bj无删减漫画免费看| 被主人野外调教暴露羞辱历程| 精精国产XXXX视频在线播放| 妺妺第一次啪啪好紧| 中文字幕乱码人妻二区三区| 国产精品网站亚洲发布| 2021少妇久久久久久久久久| 无码刺激性a片短视频| 伊人www22综合色| 色戒完整版无删减158分钟hd | 九九久久精品无码专区| 30岁少妇一摸就出水| 播放男人添女人下边视频| 国产毛多水多做爰爽爽爽| 午夜无码国产A三级视频| 久久ER99热精品一区二区| 边吃奶边摸叫床刺激a片| 小莹客厅激情1章至50章视频| 男生自慰出精gay2022| 亚洲日韩AV无码中文字幕美国| 免费A级毛片18禁网站APP| 久久精品国产久精国产| 久久av喷吹av高潮av欧美| 日本丰满白嫩bbwbbw| 车后座挺进朋友人妻女友| 欧洲精品99毛片免费高清观看| 国产精品无码AV天天爽播放器| 国产精品夜间视频香蕉| 日日狠狠久久8888偷偷色| 人与嘼AV免费| g奶大爆乳交在线观看theav| 日本三级吃奶头添泬无码苍井空|